Wie ermittelt man die optimale Konzentration?
Für den Induktor IPTG (Isopropyl-beta-d-thiogalactosid) gilt: Je höher die Konzentration, desto besser.Die optimale Konzentration hängt von den spezifischen Versuchsbedingungen und dem gewünschten Induktionseffekt ab.
Im Allgemeinen wird die IPTG-Konzentration im Bereich von 0,1–1 mM verwendet.Niedrigere Konzentrationen können nachteilige Auswirkungen auf das Zellwachstum verringern und die Zytotoxizität aufgrund der Überexpression von Zielproteinen verringern.Höhere Konzentrationen können zu einer übermäßigen Stoffwechselbelastung der Zellen führen und das Zellwachstum und die Expressionseffizienz beeinträchtigen.
Um die optimale Konzentration zu bestimmen, kann das Expressionsniveau des Zielproteins durch die Durchführung von IPTG-Induktionstests bei verschiedenen Konzentrationen ermittelt werden.Kulturtests im kleinen Maßstab können mit einer Reihe von IPTG-Konzentrationen (z. B. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM usw.) durchgeführt werden, und der Expressionseffekt bei verschiedenen Konzentrationen kann durch Nachweis des Expressionsniveaus des Zielproteins (z. B. Western) bewertet werden Blot- oder Fluoreszenzdetektion).Den experimentellen Ergebnissen zufolge wurde die Konzentration mit der besten Expressionswirkung als optimale Konzentration ausgewählt.
Darüber hinaus können Sie auch auf die einschlägige Literatur oder die Erfahrungen anderer Labore zurückgreifen, um den häufig verwendeten IPTG-Konzentrationsbereich unter ähnlichen Versuchsbedingungen zu verstehen und ihn dann entsprechend den experimentellen Anforderungen zu optimieren und anzupassen.
Es ist wichtig zu beachten, dass die optimale Konzentration je nach Expressionssystem, Zielproteinen und Versuchsbedingungen variieren kann. Daher ist es am besten, sie von Fall zu Fall zu optimieren.
Zeitpunkt der Veröffentlichung: 28.09.2023