4-Nitrophenyl beta-D-galactopyranosid CAS:200422-18-0

Wirkung: ONPG ist ein Substrat, das speziell zum Nachweis des Vorhandenseins und der Aktivität des Enzyms β-Galactosidase verwendet wird.Wenn das Enzym β-Galactosidase vorhanden und aktiv ist, spaltet es ONPG in zwei Produkte: o-Nitrophenol und ein Galactose-Derivat.Durch die Freisetzung von o-Nitrophenol kommt es zu einem gelben Farbumschlag, der mit einem Spektralphotometer gemessen werden kann.

Anwendung: ONPG hat mehrere Anwendungen in der molekularbiologischen und biochemischen Forschung:

Bestimmung der β-Galactosidase-Aktivität: ONPG wird üblicherweise zur Messung und Quantifizierung der Aktivität des β-Galactosidase-Enzyms verwendet.Die Geschwindigkeit der o-Nitrophenolbildung, die direkt proportional zur Enzymaktivität ist, kann spektrophotometrisch gemessen werden.

Genexpression und -regulation: ONPG wird häufig in Experimenten im Zusammenhang mit Studien zur Genexpression und -regulation eingesetzt.Es wird häufig in Fusionsprotein-Assays wie dem häufig verwendeten lacZ-Fusionssystem verwendet, um die Expression von Genen unter der Kontrolle spezifischer Promotoren zu untersuchen.Die mit ONPG gemessene Beta-Galactosidase-Aktivität liefert Einblicke in den Grad der Genexpression.

Screening auf β-Galactosidase-Aktivität: ONPG kann als kolorimetrische Screening-Methode in der rekombinanten DNA-Technologie verwendet werden, um das Vorhandensein und die Funktionalität des LacZ-Gens zu identifizieren, das für β-Galactosidase kodiert.Diese Screening-Methode hilft bei der Identifizierung von Klonen, die das gewünschte Gen enthalten.

Studien zur Enzymkinetik: ONPG eignet sich auch zur Untersuchung der Kinetik des Enzyms β-Galactosidase.Durch Messung der Geschwindigkeit der Enzym-Substrat-Reaktion bei verschiedenen Substratkonzentrationen ist es möglich, kinetische Parameter wie Michaelis-Menten-Konstanten (Km) und maximale Reaktionsgeschwindigkeiten (Vmax) zu bestimmen.