4-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid CAS:200422-18-0

Wirkung: ONPG ist ein Substrat, das spezifisch zum Nachweis der Anwesenheit und Aktivität des Enzyms β-Galactosidase verwendet wird. Ist β-Galactosidase vorhanden und aktiv, spaltet sie ONPG in zwei Produkte: o-Nitrophenol und ein Galactosederivat. Die Freisetzung von o-Nitrophenol führt zu einem Gelbstich, der mit einem Spektralphotometer gemessen werden kann.

Anwendung: ONPG hat verschiedene Anwendungsmöglichkeiten in der molekularbiologischen und biochemischen Forschung:

Bestimmung der β-Galactosidase-Aktivität: ONPG wird häufig zur Messung und Quantifizierung der Aktivität des Enzyms β-Galactosidase verwendet. Die Bildungsrate von o-Nitrophenol, die direkt proportional zur Enzymaktivität ist, kann spektrophotometrisch gemessen werden.

Genexpression und -regulation: ONPG wird häufig in Experimenten zur Untersuchung der Genexpression und -regulation eingesetzt. Es findet häufig Verwendung in Fusionsprotein-Assays, wie beispielsweise dem weit verbreiteten lacZ-Fusionssystem, um die Expression von Genen unter der Kontrolle spezifischer Promotoren zu untersuchen. Die mit ONPG gemessene β-Galactosidase-Aktivität liefert Aufschluss über das Ausmaß der Genexpression.

Screening auf β-Galactosidase-Aktivität: ONPG kann als kolorimetrische Screening-Methode in der rekombinanten DNA-Technologie eingesetzt werden, um das Vorhandensein und die Funktionalität des LacZ-Gens, das für β-Galactosidase kodiert, nachzuweisen. Diese Screening-Methode hilft bei der Identifizierung von Klonen, die das gewünschte Gen enthalten.

Enzymkinetikstudien: ONPG eignet sich auch zur Untersuchung der Kinetik des Enzyms β-Galactosidase. Durch Messung der Reaktionsgeschwindigkeit der Enzym-Substrat-Reaktion bei verschiedenen Substratkonzentrationen lassen sich kinetische Parameter wie die Michaelis-Menten-Konstante (Km) und die maximale Reaktionsgeschwindigkeit (Vmax) bestimmen.